上海秉越電子儀器有限公司（sī）

微生物限度儀（yí）是（shì）藥品、食品（pǐn）、化妝品等領域質量控製中用於檢測微生物汙染程度的關鍵設備，其校準的（de）準確性直接關係到檢測（cè）數據的可靠性。

以下是關於微生物限度儀校準方式的係統性（xìng）描述，涵蓋校準原理、操作步（bù）驟、驗證方法及注意事（shì）項（xiàng）。

一、校準目的與依據 　　微生物（wù）限度儀的校準旨在確保儀器滿足以下技術（shù）要求（qiú）：

1. 過濾係（xì）統性能：濾膜完整性、過（guò）濾速（sù）率及壓力（lì）控製符合標準。

2. 培（péi）養條件穩定性：溫（wēn）度、濕度、氣體環境等參數準確（què）可控。

3. 計數準確（què）性：菌落（luò）計數與標準菌株的回收率符合藥典要求。

4. 重複性（xìng）與線性：多次檢測結果的偏差在允許範圍內。 　　校準依據（jù）包括（kuò）《中國藥典》(ChP)、《美國藥典》(USP)、ISO 11133係列標準以及儀器製造商的（de）技術規範。

二、校準前準備（bèi）

1. 環境條件

- 校準需（xū）在潔淨環境(如C級潔淨區)中進行，避（bì）免微生物（wù）汙染（rǎn）幹擾。

- 溫濕度應控製在常溫（wēn）(20-25℃)、濕度≤60%(防止濾膜受潮)。

2. 標準物質與工具

- 標準菌株：如（rú）枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、白色念珠菌(Candida albicans)等，用於（yú）挑戰（zhàn）試（shì）驗（yàn）。

- 儀器工具：壓力計(精度±0.5 kPa)、流量計(精度±1 mL/min)、溫度計(±0.1℃)、顯微鏡(100倍放大)等。

- 驗證用濾膜：孔徑0.45 μm或1.0 μm(根據用途選擇)，需（xū）預先滅菌處理。

3. 儀器狀態檢查

- 清潔過濾裝置、培養艙及管路，確保（bǎo）無殘留物或堵塞。

- 檢查電源、氣壓源、溫（wēn）控係統等基礎功能正常。

三、核（hé）心校準項目與步驟

1. 過濾係統校準

- 濾膜（mó）完整性測試

- 氣泡法：將濾膜浸入水中，通入壓縮空（kōng）氣，觀察濾膜表麵是否均勻產生氣泡。無連續氣泡視為合格。

- 壓力保（bǎo）持法：向濾膜施加標準（zhǔn）壓力(如20 kPa)，保持30秒，壓力下（xià）降不（bú）超過5%為合格。

- 微生（shēng）物（wù）挑戰法：使用枯草芽孢杆菌懸液(約1×10⁶ CFU/mL)，過濾後培養，濾膜背麵（miàn）無菌（jun1）落生長則完整性合格。

- 過濾速率與壓力校準

- 設定不同壓力值(如10 kPa、20 kPa)，測定500 mL標準菌液(如（rú）大腸埃希菌懸液，1×10³ CFU/mL)的過濾時間。

- 對比實際過濾時間與儀（yí）器標稱值，偏差應≤10%。 　　- 記錄壓力-流（liú）量曲線，確保線性關係（xì）符合儀器設計參數。

2. 培（péi）養條件校準

- 溫度均勻性驗證

- 在培養艙（cāng）內放置（zhì）至少3個溫度探頭(上、中、下（xià）位置)，設置37℃(細菌培養)或25℃(黴菌培養)，穩定（dìng）後各點溫（wēn）差應≤0.5℃。

- 使用恒溫（wēn）培養箱作（zuò）為對照，確保儀器溫控係統無偏差。

- 濕度與氣體環境控製

- 對於需厭氧（yǎng）條件的培養，需（xū）驗證氮氣或二氧化碳的流量(如10-20 mL/min)，並通過厭氧指（zhǐ）示（shì）劑(如亞甲藍)確（què）認無氧（yǎng）環境。

- 濕度控製可通過放置（zhì）幹燥（zào）劑或加濕裝置，目標濕度範圍為50-70%。 　　3. 計數準確性驗證

- 標準菌株（zhū）回收率試驗

- 製備已知（zhī）濃度的標準菌液（yè）(如枯草芽孢杆（gǎn）菌，10-100 CFU/mL)，按儀器程序過濾並培養。

- 計算回收率：回收（shōu）率 = (實（shí）際CFU / 理論CFU) × 100%，需（xū）達到50%-200%(參考ChP要求)。

- 平行測試（shì）6次，計算相對標準（zhǔn）偏差(RSD)，要求RSD ≤20%。

- 陰性對照與空白驗證

- 使用無（wú）菌生（shēng）理鹽水代替菌液，過濾後培養，陰性對照組（zǔ）應無微生物生長。

- 檢查濾（lǜ）膜（mó）本身無菌落，排除假陽性幹擾。

4. 重複性（xìng）與（yǔ）線性（xìng）驗證

- 重複性測試

- 同一批次菌液（yè）(如（rú）黑曲（qǔ）黴懸液，濃度1×10² CFU/mL)重複過濾6次，計算CFU的RSD，要（yào）求≤15%。

- 不同操作人（rén）員測試同一樣品，結果偏差應≤10%。

- 線（xiàn）性範圍驗證

- 製備梯度濃度菌液(如10¹-10⁴ CFU/mL)，過濾後（hòu）計數，繪製CFU-濃度曲線。

- 線性相關係數(R²)應≥0.98，表明儀器（qì）在量程內（nèi）響應良好。

四、校準周期與記錄

- 校準頻率：建議（yì）每年至少校準一次，或在以下情況後重新（xīn）校準：

- 儀器維修、關（guān）鍵部件更換(如濾膜夾具、壓力傳感器)。

- 檢測數（shù）據異常波動或不符合曆史趨勢。

- 實驗室搬遷或環境條（tiáo）件重大變化。

- 記錄與證書（shū）

- 詳（xiáng）細記錄校準數據、使用的標定設備、操作人員及結論（lùn）。

- 出具校準（zhǔn）證書，標明儀器編號、有效期及符合的標準（zhǔn）(如ChP、ISO)。

五、常見故障與應對措施

1. 濾速（sù）異常

- 原因：濾膜堵（dǔ）塞、壓力傳感器失靈、管路泄漏。

- 解決：更（gèng）換濾膜，校準壓力計，檢查氣密性。

2. 溫度偏差過大

- 原因：加熱模塊老（lǎo）化、溫控探頭位置偏（piān）移。

- 解決：調整探頭位置，更換加熱元件。

3. 回收率偏低

- 原因：濾膜吸（xī）附微（wēi）生物、培（péi）養時間不足。

- 解決：改用低吸附濾膜(如混合纖維素酯（zhǐ）膜（mó）)，延長培養時間至72小時（shí）。